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組織搗碎機(jī)在生化制備中常用的方法

更新時(shí)間:2022-01-07點(diǎn)擊次數(shù):1729
 在生化制備中常用的方法有: 
1. 反復(fù)凍溶法 原理:因突然冷凍,細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度的突然改變而破壞細(xì)胞。 方法:將待破碎的細(xì)胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。 特點(diǎn):此法適用于組織細(xì)胞,多用于動(dòng)物性材料,對(duì)微生物細(xì)胞作用較差。 
2. 急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細(xì)菌及病材料。
3. 超聲波處理 用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂,此法多適用于微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,頻高于15~20KHz的超聲波在高強(qiáng)度聲能輸入下可以進(jìn)行細(xì)胞破碎。其破碎機(jī)理:可能與空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪切力有關(guān)。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度及種類型等因素有關(guān)。 行細(xì)胞破碎。其破碎機(jī)理:可能與空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪切力有關(guān)。超聲破碎的效率與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度及種類型等因素有關(guān)。 特點(diǎn):操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性較好,節(jié)省時(shí)間;多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎。 存在問題:超聲波破碎在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模應(yīng)用較普遍,處理少量樣品時(shí)操作簡(jiǎn)便,液量損失少,但是超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)變性失活。而且大容量裝置聲能傳遞,散熱均有困難,應(yīng)采取相應(yīng)降溫措施。對(duì)超聲波敏感和核酸應(yīng)慎用。空化作用是細(xì)胞破壞的直接原因,同時(shí)會(huì)產(chǎn)生活性氧,所以要加一些巰基保護(hù)劑。 
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